A protocol of cell molecular biology experiment

人和哺乳动物细胞基因组DNA制备法
一、从培养物和组织细胞中提取DNA
二、从人全血细胞中提取基因组DNA
从真核细胞中抽提总RNA
一、异硫氰酸胍-超离心法
二、NP40法
三、胍酚氯仿法
制备高纯度mRNA—寡脱氧胸苷纤维素柱层析法
制备高纯度mRNA-寡脱氧胸苷乳胶法
寡聚脱氧胸苷纤维素柱精制mRNA
质粒DNA的提取
氯化铯密度梯度超离心提取质粒DNA
噬菌体DNA的制备和纯化
小量酵母DNA制备法
聚合酶链反应技术
聚合酶链反应-单股构型多态性方法
反转录聚合酶链反应法
原位杂交技术
缺口平移和多头引物
缺口平移法制备α-32P标记的探针
随机引物法制备α-32P-dNTP标记DNA探针
末端标记法
琼脂糖凝胶电泳
DNA连接前的脱磷反应
一、脱磷反应Ⅰ
二、脱磷反应Ⅱ
DNA序列分析
DNA酶Ⅰ“足迹”法
核失控转录测定法
分离酵母人工染色体插入片段
人基因组限制性酶切片段的制备和分离
DNA的部分酶解
哺乳动物细胞基因的导入
一、磷酸钙共转染法
二、DEAE-葡聚糖法导入基因
三、脂质转染
四、电穿孔法
融合蛋白表达及其多克隆抗体的制备
附一
附二
Southem印迹杂交
用Southem印迹法分析DNA分子上的DNA酶Ⅰ高敏感位点
Northern印迹杂交
感受态细菌制备及转化实验
cDNA的合成和克隆
一、单链cDNA的合成
二、双链cDNA的合成
三、核酸酶S1消化双链cDNA
四、核酸酶S1消化产物的分离——蔗糖密度梯度离心法
五、双链DNA加尾
六、退火
七、转化
λgtll cDNA文库扩增及免疫法筛选
一、文库扩增
二、免疫筛选λgtll cDNA文库
十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳和Western印迹
一、十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳
二、Western印迹
35S和32P标记细胞
一、35S-甲硫氨酸标记
二、32P-正磷酸盐标记
附录一 常用试剂配制
附录二 有关技术
附录三 名词解释
附录四 限制性内切酶的使用方法说明
附录五 常用限制酶识别序列
附录六 遗传密码
附录七 氨基酸符号及密码子
附录八 相关技术资料