高效液相色谱方法及应用（第三版）

*章绪论

*节　高效液相色谱方法简介 2

一、液相色谱技术的初现—茨维特的经典实验 2

二、高效液相色谱方法的显现 3

三、高效液相色谱方法的发展现状 6

第二节　高效液相色谱方法的特点 13

一、与经典液相（柱）色谱法比较 13

二、与气相色谱法比较 14

三、高效液相色谱法的特点 15

第三节　高效液相色谱方法的分类 15

一、按溶质在两相分离过程的物理化学原理分类 15

二、按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类 17

第四节　高效液相色谱法的应用范围和局限性 19

一、应用范围 19

二、方法的局限性 19

参考文献 20



第二章　高效液相色谱仪简介

*节　流动相及储液罐 23

一、储液罐 23

二、流动相脱气 24

第二节　高压输液泵及梯度洗脱装置 26

一、高压输液泵 26

二、输液系统的辅助设备 39

三、梯度洗脱装置 41

第三节　进样装置 44

一、停流进样装置 44

二、六通阀进样装置 45

三、自动进样器 47

第四节　色谱柱 48

一、柱材料及规格 48

二、柱填料和柱寿命 49

三、保护柱 50

四、柱连接方式 51

五、柱温控制 51

第五节　检测器 52

一、检测器的分类和响应特性 52

二、紫外吸收检测器 54

三、折光指数检测器 60

四、电导检测器 62

五、荧光检测器 63

六、蒸发光散射检测器 64

七、带电荷气溶胶检测器 68

八、多角度光散射检测器 70

九、质谱检测器 72

第六节　色谱数据处理装置 81

一、手持控制器 81

二、化学工作站 81

第七节　高效液相色谱仪器的发展趋势 82

一、从1969年到1992年 82

二、从1992年到2002年 83

三、从2002年到2012年 83

四、2012年到现在 84

参考文献 88



第三章　液固色谱法和液液色谱法

*节　分离原理 90

一、吸附系数 90

二、分配系数 91

第二节　固定相 92

一、液固色谱固定相 92

二、液液色谱固定相 106

第三节　流动相 107

一、表征溶剂特性的重要参数 109

二、液固和液液色谱的流动相 116

第四节　二元溶剂体系中液固和液液色谱的保留规律 117

一、溶质保留值的基本方程式 117

二、液固色谱的保留值方程式 118

三、液液色谱的保留值方程式 118

参考文献 119



第四章　正相和反相键合相色谱法

*节　分离原理 120

一、正相键合相色谱法的分离原理 121

二、反相键合相色谱法的分离原理 121

第二节　固定相 123

一、键合固定相的制备及分类 123

二、键合固定相的性质 129

三、使用键合固定相应注意的问题 131

第三节　流动相 133

一、溶剂的选择性分组 133

二、在键合相色谱分析中选择流动相的一般原则 134

三、改善色谱分离选择性的方法 138

四、多元混合溶剂的多重选择性 140

五、由溶剂选择性三角形描述混合溶剂组成的特性 143

六、溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律 143

七、用线性溶剂化自由能关系（LSER）来表征反相液相色谱中溶质的保留值方程式 144

第四节　新型高效化学键合固定相 146

一、新型单齿键合固定相 146

二、新型双齿键合固定相 148

三、杂化有机/无机粒子材料 149

四、氟化烷基和苯基固定相 152

五、反相/离子交换混合模式固定相 154

第五节　化学键合固定相分类方法简介 157

一、Tanaka分类方法 158

二、Tanaka分类表征方法 160

三、扩展Tanaka分类方法 161

第六节　离子对色谱法 166

一、分离原理 166

二、固定相、流动相和对（反）离子 167

三、影响离子对色谱分离选择性的因素 168

参考文献 171



第五章　亲水作用键合相色谱法

*节　亲水作用液相色谱的分离机理 176

一、分子极性 176

二、分离机理 176

第二节　固定相 178

一、固定相的分类 178

二、固定相保留特性及选择性的评价标准 188

第三节　流动相 197

一、流动相的组成 197

二、流动相对保留值和选择性的影响 197

三、流动相各种影响因素的图示方法 205

第四节　静电排斥亲水作用液相色谱 207

参考文献 209



第六章　疏水作用键合相色谱法

*节　疏水作用液相色谱的分离原理 211

一、蛋白质结构特点 212

二、疏水作用机理 212

三、两亲作用色谱 213

第二节　固定相 214

一、固定相载体 214

二、疏水配位体 215

第三节　流动相 215

一、流动相的组成 215

二、影响HIC分离选择性的因素 216

第四节　疏水作用色谱的应用 217

一、疏水作用色谱的操作过程 217

二、蛋白质混合物的分离 218

参考文献 219



第七章　梯度洗脱

*节　基本原理 221

一、等度洗脱 221

二、梯度洗脱 222

第二节　影响梯度洗脱的各种因素 224

一、梯度洗脱时间（tG）对分离的影响 224

二、梯度陡度（T）对保留值的影响 224

三、强洗脱溶剂组分B浓度变化范围（Δφ）的影响 225

四、柱温变化对保留值的影响 227

五、梯度洗脱程序曲线形状的影响 228

六、流动相流速（F）对梯度洗脱的影响 229

七、色谱柱死体积（Vm）对梯度洗脱时间（tG）的影响 231

八、色谱系统的滞留体积（VD）对梯度洗脱时间（tG）的影响 231

第三节　优化梯度洗脱的方法 232

一、建立梯度洗脱方法的一般步骤 232

二、梯度洗脱中的实验条件 234

第四节　梯度洗脱的图示方法 237

一、二元溶剂梯度洗脱 237

二、三元溶剂梯度洗脱 238

三、四元溶剂梯度洗脱 240

四、用极坐标和球面坐标描述梯度洗脱 241

参考文献 243



第八章　高效液相色谱法的基本理论

*节　表征液相色谱柱填充性能的重要参数 245

一、总孔率 246

二、柱压力降 246

三、柱渗透率 247

第二节　高效液相色谱的速率理论 247

一、影响色谱峰形扩展的各种因素 248

二、范第姆特方程式的表达及图示 251

第三节　诺克斯方程式 252

一、描述色谱柱性能的折合参数 252

二、诺克斯方程式 253

三、诺克斯方程式在表面多孔粒子（SPP）填充色谱柱中的应用255

第四节　色谱柱的操作参数、“无限直径” 效应和柱外效应 257

一、三个柱操作参数的表达式 257

二、“无限直径”效应 257

三、柱外效应 259

第五节　分离阻抗和动力学图 261

一、分离阻抗 261

二、动力学图 262

第六节　超高效液相色谱 269

一、超高效液相色谱的理论基础 269

二、实现超高效液相色谱的必要条件 271

三、超高效液相色谱的特点、现状及在快速和超快速液相色谱分析中的应用 277

四、HPLC和UHPLC之间的方法转换 284

第七节　高效液相色谱分离条件的优化 291

一、色谱参数的分类 291

二、色谱参数的相关性 291

三、色谱分离条件优化标准的选择 292

四、色谱分离条件的优化方法 293

五、等度洗脱和梯度洗脱的优化图示方法 293

六、优化HPLC分离条件的计算机辅助方法 296

参考文献 297



第九章　微柱液相色谱法

*节　方法简介 299

一、微型柱的分类 300

二、微柱液相色谱法的优点和缺点 301

第二节　基本理论 302

一、柱外效应 302

二、管壁效应 305

三、稀释效应 307

四、分离阻抗 308

第三节　仪器装置 308

一、输液泵系统 309

二、进样系统 310

三、柱系统 314

四、检测器系统 315

五、连接管和接头 318

第四节　微柱的制备 319

一、评价微柱性能的重要参数 320

二、影响微柱分离效率的相关参数 321

三、微柱的制备方法 322

第五节　微柱液相色谱的新技术 326

一、纳米液相色谱技术 327

二、填充毛细管柱超高压液相色谱技术 335

参考文献 343



第十章　二维高效液相色谱法

*节　描述分离体系效能的参数 345

一、峰容量 345

二、信息量 347

第二节　二维高效液相色谱的技术功能 348

一、切割功能 349

二、反冲洗脱功能 350

三、痕量组分的富集功能 350

第三节　二维高效液相色谱的流路系统 350

一、多通路切换阀 351

二、流路系统 351

第四节　二维高效液相色谱在蛋白质组学研究中的应用 357

第五节　二维高效液相色谱在食品分析中的应用 368

一、离线全二维高效液相色谱分析蓝莓中的色素 369

二、在线全二维高效液相色谱分析脂肪酸三甘油酯 370

三、在线全二维高效液相色谱分析红辣胡椒中的类胡萝卜素和类胡萝卜素酯 371

四、在线全二维高效液相色谱分析天然抗氧化剂中的有效成分 371

参考文献 372



第十一章　高效液相色谱新技术进展

*节　整体色谱柱 374

一、聚合物整体柱 375

二、硅胶整体柱 378

第二节　绿色流动相 383

一、超热水流动相 384

二、其他绿色流动相 387

第三节　剪切驱动色谱 387

一、仪器构成及操作方法 388

二、固定相、流动相和分析实例 390

第四节　超高效合相色谱 391

一、超高效合相色谱方法原理简介 391

二、超高效合相色谱仪的结构特点 394

三、超高效合相色谱仪的性能特点 398

参考文献 402



第十二章　建立高效液相色谱分析方法的一般步骤和实验技术

*节　样品的性质及柱分离模式的选择 405

一、样品的溶解度 405

二、样品的分子量范围 406

三、样品的分子结构和分析特性 406

第二节　分离操作条件的选择 412

一、容量因子和死时间的测量 412

二、色谱柱操作参数的选择 413

三、样品组分保留值和容量因子的选择 414

四、相邻组分的选择性系数和分离度的选择 414

第三节　高效液相色谱法的实验技术 416

一、溶剂的纯化技术 416

二、色谱柱的装填技术 416

三、色谱柱的平衡、保护与清洗、再生技术 420

四、梯度洗脱技术 425

五、色谱柱前和柱后的衍生化技术 426

六、样品的预处理技术 428

参考文献 437



符号表 439