核酸的凝胶电泳:实践方法

目录
重要说明
缩写
第一章 RNA的凝胶电泳
1 引言
2 管状聚丙烯酰胺凝胶电泳
2．1 设备
2．2 制备凝胶
2．3 电泳设备的组装
2．4 样品制备和加样
2．5 凝胶的电泳
2．6 凝胶扫描
2．7 凝胶切片
2．8 凝胶切片放射性的测定
2．9 RNA的洗脱和回收
3 管状凝胶法的若干改进
3．1 电泳前DNA的去除
3．2 加样前RNA的变性
3．3 非控制温度下的电泳
3．4 梯度凝胶
3．5 可溶性聚丙烯酰胺凝胶
3．6 琼脂糖—丙烯酰胺复合凝胶
3．7 其他电泳缓冲液
4 变性凝胶
4．1 甲酰胺凝胶
4．2 尿素凝胶
4．3 羟甲基汞凝胶
5 分子量的测定
5．1 非变性凝胶
5．2 变性凝胶
6 板状聚丙烯酰胺凝胶电泳
6．1 装置
6．2 凝胶配方
6．3 灌胶
6．4 电泳
6．5 板状凝胶中RNA的检测和回收
6．6 RNA转移至重氮苄氧甲基纸上的杂交分析
7 聚丙烯酰胺凝胶电泳存在的问题及其解决办法
8 组蛋白信使RNA的纯化：实例研究
参考文献
第二章 DNA的凝胶电泳
1 引言
2 主要技术及其应用
2．1 装置
2．2 非变性凝胶缓冲液
2．3 变性凝胶缓冲液
2．4 凝胶制备
2．5 样品制备和加样
2．6 凝胶电泳标准DNA的大小
2．7 电泳条件
2．8 电泳后的凝胶分析
2．9 从琼脂糖凝胶回收DNA片段
2．10 用杂交法分析DNA片段
3 DNA的大规模制备性凝胶电泳
3．1 环形制备装置
3．2 线形制备装置
3．3 分级分离的实例
4 致谢
参考文献
第三章 核酸双向凝胶电泳
1 RNA双向凝胶电泳导论
1．1 影响RNA在聚丙烯酰胺凝胶中电泳迁移率的因素
1．2 双向凝胶系统的主要类型
2 RNA双向电泳分离的仪器和实验程序
2．1 第一向电泳分离
2．2 第二向电泳分离
2．3 程序的变动与修正
2．4 温度控制
2．5 放射自显影
2．6 无放射性RNA的检测
2．7 切片放射性的测定
2．8 从凝胶中回收RNA
3 双向电泳分离RNA的实例
3．1 寡核苷酸的分离
3．2 RNA片段的分离
3．3 小分子RNA的分离
3．4 mRNA的分离
4 DNA双向凝胶电泳概述
5 限制片段的常规凝胶电泳分离DNA
5．1 电泳分离的基础
5．2 第一向凝胶电泳分离
5．3 第二向凝胶电泳分离
5．4 技术应用实例：病毒DNA限制酶切片段的分离
6 变性梯度凝胶分离DNA限制酶切片段
6．1 分离的基础
6．2 装置
6．3 第一向分离
6．4 第二向分离
6．5 凝胶的染色和放射自显影
6．6 技术应用实例：细菌DNA限制酶切片段的分离
7 致谢
参考文献
第四章 DNA序列分析
1 引言
2 用链终止法进行DNA序列分析
2．1 仪器和材料
2．2 微量液体的操作
2．3 引物片段的特征
2．4 DNA片段的分离
2．5 单链DNA模板的制备
2．6 引物和模板的退火
2．7 引物DNA的合成反应
2．8 核糖取代反应：除去引物片段的另一种方法
2．9 链终止法测定DNA序列的应用
3 DNA序列分析用聚丙烯酰胺凝胶的制备
3．1 仪器
3．2 材料
3．3 制备凝胶模型
3．4 贮备液
3．5 灌胶
3．6 制备电泳凝胶
3．7 加样
3．8 电泳
3．9 制备放射自显影凝胶
3．10 放射自显影
4 链终止序列测定中放射自显影图谱的阅读和释意
4．1 凝胶放射自显影图谱释义中的一般性问题
5 M13序列分析系统
5．1 噬菌体M13的特征
5．2 M13克隆系统
5．3 M13克隆系统的应用
5．4 用M13系统进行链终止序列分析
6 DNA序列的化学分析法
6．1 主要方法步骤
6．2 仪器和材料
6．3 DNA片段的用量和纯化
6．4 DNA片段的末端标记
6．5 标记一端的DNA片段的分离
6．6 碱基特异性的裂解反应
6．7 反应产物的电泳
6．8 Maxam—Gilbert序列分析凝胶的放射自显影图谱的阅读与释意
7 计算机的使用
参考文献
第五章 RNA序列分析
1 引言
2 用于序列分析的RNA分离
3 RNA微克数量级的处理
3．1 核糖核酸酶的预防
3．2 反应容器
3．3 RNA的乙醇沉淀
4 序列分析用RNA的末端标记综述
4．1 5'末端标记
4．2 3'末端标记
4．3 制备性凝胶电泳
5 序列分析所用末端标记RNA的制备
5．1 除去帽子结构
5．2 用[γ—32P]ATP和T4多核苷酸激酶标记5'末端
5．3 用[5'—32P]pCp和T4RNA连接酶标记3'末端
5．4 聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化32P—RNA
5．5 从聚丙烯酰胺凝胶中洗脱32P—RNA
6 序列分析前的RNA专一性裂解
6．1 核糖核酸酶H的片段化战略
6．2 RNA的位点专一性切割
7 RNA的碱基专一性切割：酶促序列分析
7．1 概述
7．2 RNA酶法序列分析的步骤
7．3 RNA的碱水解
8 RNA的碱基专一性切割：化学序列分析法
8．1 概述
8．2 RNA化学序列分析的程序
9 RNA序列分析用凝胶
9．1 主要考虑的因素
9．2 薄层序列分析凝胶的灌胶
9．3 序列分析凝胶的放射自显影
9．4 放射自显影图谱的解读
参考文献
第六章 核蛋白的电泳
1 核小体的电泳
1．1 引言
1．2 仪器
1．3 贮备液
1．4 样品的制备
1．5 聚丙烯酰胺凝胶平板的制备
1．6 加样与电泳
1．7 各种核小体带的检测
1．8 从凝胶中提取核小体颗粒
1．9 核小体中蛋白质和DNA的回收与分析
1．10 可能出现的问题及其解决办法
1．11 核小体的双向电泳
2 核糖体和多核糖体的电泳
2．1 引言
2．2 仪器
2．3 贮备液
2．4 样品制备
2．5 琼脂糖—丙烯酰胺复合凝胶的制备
2．6 加样与电泳
2．7 凝胶染色
2．8 双向凝胶电泳
2．9 各种复合凝胶的应用
2．10 可能出现的问题及其矫正措施
参考文献
附录
Ⅰ 核酸分子量的标准试剂
Ⅱ 供应电泳专用商品的厂商
U2
B