生物化学与分子生物学实验技术教程

目录
第一章 生物化学与分子生物学中的定量分析
第一节 滴定分析法
一 基本原理
二 标准溶液
三 滴定分析的计算
四 减小滴定误差的方法
第二节 紫外可见分光光度法
一 基本原理
二 分光光度计的主要部件
三 分光光度法的定性和定量
四 减小测量误差的方法
第三节 荧光分析法
一 基本原理
二 荧光仪的主要部件
三 荧光分析法的定性和定量
四 减小测量误差的方法
第四节 酶活力及动力学数据的测定
一 酶活力的测定
二 〓和〓的测定
三 其他动力学数据的测定
实验1-1 粗脂肪的提取和定量测定
实验1-2 碘价的测定(Hanus法)
实验1-3 皂化价的测定
实验1-4 酸价的测定
实验1-5 脂肪乙酰价的测定
实验1-6 蛋白质的测定（凯氏定氮法）
实验1-7 2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量
实验1-8 碘量法测定维生素C的含量
实验1-9 血糖定量测定(GOD-PAP法)
实验1-10 蒽酮比色定糖法
实验1-11 肝素钠的容量测定
实验1-12 血清胆固醇的定量测定（磷硫铁法）
实验1-13 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）
实验1-14 双缩脲法测定蛋白质含量
实验1-15 Folin试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量
实验1-16 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量
实验1-17 紫外吸收法测定蛋白质含量
实验1-18 紫外吸收法测定核酸含量
实验1-19 二苯胺显色法测定DNA含量
实验1-20 地衣酚显色法测定RNA含量
实验1-21 定磷法测定核酸含量
实验1-22 荧光法测定维生素〓含量
实验1-23 枯草芽孢杆菌蛋白酶活力测定
实验1-24 血清丙氨酸氨基移换酶(ALT)的测定
实验1-25 酸性磷酸酯酶的测定
实验1-26 碱性磷酸酶的反应动力学性质
第二章 生物大分子的提取、沉淀和离心分离
第一节 生物大分子的提取
一 材料的选择与处理
二 确定测定方法
三 细胞的破碎
四 抽提
第二节 沉淀分离技术
一 蛋白质的沉淀分离
二 核酸的提取与沉淀分离
第三节 离心分离技术
一 离心机的种类与用途
二 离心分离方法的选择
三 离心条件的确定
实验2-1 醇脱氢酶的提纯
实验2-2 大蒜细胞SOD的提取与分离
实验2-3 大鼠肝rRNA的提取与分离
实验2-4 枯草芽孢杆菌碱性磷酸酶的提取与盐析
实验2-5 枯草芽孢杆菌DNA的提取与分离
实验2-6 酵母RNA的提取与分离
实验2-7 从肝脏中提取DNA
实验2-8 大肠杆菌细胞膜的分离
实验2-9 RNA的蔗糖密度梯度离心分离
实验2-10 大鼠肝细胞核的分离
第三章 层析技术
第一节 吸附层析
一 吸附柱层析
二 聚酰胺薄膜层析
第二节 分配层析
一 概述
二 纸层析
第三节 凝胶层析
一 基本原理
二 凝胶的选择
三 操作
第四节 离子交换层析
一 基本原理
二 离子交换剂
三 操作
第五节 亲和层析
一 配基与偶联凝胶的选择与处理
二 亲和层析的操作条件
第六节 薄层层析
一 支持剂的选择与处理
二 薄层板的制作
三 层析方法
第七节 气相色谱
一 基本原理
二 气相色谱的气路系统
三 色谱柱
四 检测器
五 定性和定量方法
第八节 高效液相色谱
一 概述
二 HPLC的特点
三 HPLC的分类
四 HPLC的仪器构成
五 定性定量方法
实验3-1 氨基酸的纸层析
实验3-2 微晶纤维素薄板层析法分离氨基酸
实验3-3 核苷酸的离子交换层析
实验3-4 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析
实验3-5 凝胶层析测定蛋白质的〓
实验3-6 鸡卵类黏蛋白的制备
实验3-7 胰蛋白酶的亲和层析
实验3-8 醇酯成分的气相层析
实验3-9 HPLC法测定生物类黄酮含量
实验3-10 HPLC法测定维生素A含量
实验3-11 HPLC法测定维生素D含量
第四章 电泳技术
第一节 基本原理
一 泳动度
二 影响泳动度的因素
第二节 醋酸纤维素薄膜电泳
第三节 琼脂糖凝胶电泳
一 琼脂糖凝胶的特点
二 DNA的琼脂糖凝胶电泳
三 印迹转移电泳
四 交变脉冲电场凝胶电泳
第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
一 聚丙烯酰胺凝胶的特点
二 凝胶聚合的原理及有关特性
三 PAGE原理
四 SDS-PAGE原理
五 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳原理
六 聚丙烯酰胺凝胶双向电泳原理
七 染色方法
第五节 高效毛细管电泳
一 基本原理
二 实验方法
三 分离类型及应用
实验4-1 血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳
实验4-2 垂直板PAGE分离血清蛋白
实验4-3 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量
实验4-4 SDS-PAGE的银染色法
实验4-5 水平超薄型IEF-PAGE
实验4-6 蛋白质的双向凝胶电泳
实验4-7 DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验4-8 PAGE分离RNA
实验4-9 对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白
实验4-10 火箭免疫电泳法测定抗原含量
第五章 分子生物学基本技术
第一节 DNA的体外合成
一 DNA的化学合成
二 聚合酶链反应技术
第二节 核酸的分子杂交
一 探针的种类与选择
二 标记物的选择
三 探针的放射性同位素标记
四 探针的非放射性标记
五 膜上印迹杂交的条件选择
六 杂交信号的检测
第三节 基因克隆
一 目的基因的来源
二 常用的克隆载体
三 DNA分子的体外连接
四 重组子导入受体细胞
五 重组子的筛选
六 基因组文库的构建
七 cDNA文库的构建
第四节 基因表达
一 原核生物的表达载体
二 用于原核细胞表达的外源基因
三 提高表达水平的措施
四 外源基因在哺乳动物细胞中的表达
五 转基因植物
第五节 转录调控研究技术
一 基因功能状态的研究方法
二 顺式作用元件与反式作用因子的分析方法
实验5-1 血液标本中DNA的提取
实验5-2 哺乳动物基因组DNA的提取
实验5-3 mRNA提取与纯化
实验5-4 脉冲电场电泳分离DNA
实验5-5 大肠杆菌的转化
实验5-6 质粒DNA的提取
实验5-7 质粒DNA的酶切及电泳鉴定
实验5-8 质粒DNA的分子杂交
实验5-9 使用光敏生物素探针的Southern杂交
实验5-10 DNA重组
实验5-11 PCR扩增DNA
实验5-12 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)
实验5-13 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达
附录 常用缓冲液的配制
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