Transfection experiment technology

第1章转染实验技术概述1
11转染实验技术简介1
111转染实验技术的概念1
112外源基因转染真核细胞的目的、意义1
12转染实验技术的分类及原理2
121病毒感染法2
122非病毒感染法3
13转染实验技术的应用5
14新材料与新技术在转染实验技术中的应用7
参考文献8
第2章目的基因的获取9
21目的基因概述9
22化学合成法获取目的基因11
221磷酸二酯法12
222磷酸三酯法14
223亚磷酸三酯法15
224寡核苷酸连接法15
23基因组文库钓取目的基因17
24cDNA文库钓取目的基因19
241mRNA的分离纯化（过程）20
242双链cDNA的体外合成20
25PCR获取目的基因24
251PCR扩增DNA的基本原理24
252PCR扩增产物的克隆26
253PCR技术在目的基因制备中的应用27
26RTPCR法获取目的基因27
参考文献28
第3章基因表达载体的选择29
31基因表达载体概述29
32基因表达载体分类31
33基因表达载体的遗传标记32
34常用原核基因表达质粒载体34
35常用真核基因表达质粒载体38
36病毒型表达载体42
361噬菌体载体43
362反转录病毒载体49
363腺病毒载体52
37可表达融合蛋白的载体54
371谷光甘肽S转移酶（GST）融合蛋白载体54
372pMALTM融合蛋白表达载体56
38基因表达载体的改造57
381报道基因的改造57
382启动子的研究57
383大容量载体57
参考文献58
第4章重组子的构建与鉴定59
41限制性内切酶59
42黏断连接方法及重点技术60
421单酶切位点的连接60
422双酶切位点的连接61
423同工异源酶及同尾酶酶切位点的连接62
43平端连接方法及重点技术62
44酶切位点的改造和连接63
441黏断切口转化为平端切口的连接63
442人工接头的设计及人工黏断切口的制备63
443酶切位点的化学修饰64
45重组子的筛选与鉴定64
451表型水平筛选65
452分子水平鉴定66
参考文献68
第5章化学转染方法将重组体导入真核细胞69
51磷酸钙共沉淀法69
511磷酸钙共沉淀法原理69
512转染试剂、材料69
513仪器设备70
514操作步骤70
515注意事项及影响因素72
52DEAE葡聚糖法转染73
521DEAE葡聚糖法转染原理73
522转染试剂73
523仪器设备74
524操作步骤74
525操作注意事项74
53脂质体介导的转染75
531脂质体介导的转染原理75
532转染试剂77
533仪器设备77
534操作步骤77
535操作注意事项78
54纳米材料介导的转染78
541纳米材料介导的转染原理79
542转染试剂79
543仪器设备79
544操作步骤79
545操作注意事项81
参考文献81
第6章物理转染方法将重组体导入真核细胞82
61显微注射法转染82
611显微注射法原理83
612转染试剂83
613仪器设备83
614操作步骤84
615操作注意事项85
62电穿孔法转染86
621电穿孔法转染原理86
622转染试剂87
623仪器设备88
624操作步骤89
625操作注意事项89
63基因枪转染90
631基因枪技术的发展历史90
632基因枪介导的转染原理和设备90
633转染试剂：微弹载体、DNA微载体92
634操作步骤93
635操作注意事项94
636基因枪技术作为新兴的转移基因的优点94
637基因枪的发展趋势94
参考文献95
第7章病毒转染方法将重组体导入真核细胞96
71病毒转染系统概述96
72包装细胞概述96
73高浓度病毒原液的收集及滴度测定方法97
731高浓度病毒原液收集97
732病毒滴度测定方法97
74病毒转染的辅助系统98
741转染试剂98
742细胞状态98
743转染方法98
744载体构建100
75腺病毒介导的转染100
751腺病毒介导的转染原理100
752转染试剂101
753仪器设备104
754操作步骤105
755操作注意事项112
76反转录病毒介导的转染112
761反转录病毒介导的转染原理112
762转染试剂115
763仪器设备116
764操作步骤116
765操作注意事项118
参考文献119
第8章转染成功细胞的选择120
81遗传报道基因系统120
811报道基因系统概述120
812报道基因的分类及使用选择122
813报道基因技术的前景展望123
814常见的报道基因124
82报道基因的同位素分析法127
821放射性同位素的基本性质128
822射线的防护128
83报道基因的非同位素分析法129
831酶联免疫法（ELISA）129
832荧光法133
833免疫组织化学染色法133
参考文献135
第9章转染技术的应用137
91转基因动物及基因敲除动物137
911转基因动物的定义137
912制备转基因动物的方法137
913基因敲除动物138
92转基因植物139
921转基因植物的定义139
922常用的植物转基因方法139
923转基因植物的主要应用方向140
93基因制药140
931基因制药概述140
932基因工程药物生产的基本过程141
933基因制药技术的主要应用141
94基因治疗142
941遗传性疾病的基因治疗142
942肿瘤基因治疗143
943其他疾病的基因治疗143
95RNA干扰治疗143
951在骨病治疗中的应用144
952在神经系统疾病中的应用144
953在肿瘤治疗中的应用145
954在抗病毒治疗中的应用145
955在皮肤病治疗中的应用145
参考文献146