分子生物学实验技术

第1章　核酸分离提取技术1引言1第1节碱裂解法提取质粒DNA1第2节磁珠法提取质粒DNA4第3节质粒DNA琼脂糖凝胶电泳及其胶回收7第4节E.coli基因组DNA的提取10第5节RNA的分离提取14参考文献18第2章　PCR及实时荧光定量PCR技术19引言19第1节DNA序列的PCR扩增19第2节实时荧光定量PCR技术测定目标DNA含量24参考文献40第3章　基因工程菌的构建与表达产物鉴定技术41引言41第1节E.coli感受态细胞的制备、质粒DNA重组与转化41第2节SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质45第3节蛋白质的Western印迹分析50参考文献56第4章　基因工程蛋白的工程化生产技术57引言57第1节基因工程蛋白的原核表达工程化技术58第2节原核表达基因工程蛋白的分离纯化68第3节基因工程蛋白的真核表达工程化技术75第4节真核表达基因工程蛋白的分离纯化82参考文献88第5章　基因定点突变、基因敲除及微生物分子生物学鉴定技术89引言89第1节基因定点突变技术89第2节基于RecA同源重组的基因敲除技术94第3节基于16SrRNA序列分析等相关技术鉴定微生物107参考文献119第6章　蛋白质双向电泳、质谱鉴定及结晶技术120引言120第1节蛋白质双向电泳120第2节蛋白质的质谱鉴定131第3节蛋白质表达、纯化与结晶138参考文献151第7章　生物信息学网络资源利用152引言152第1节生物信息数据库152第2节核酸与蛋白质序列分析158参考文献163附录164附录Ⅰ实验报告撰写方法164附录Ⅱ实验室安全守则165附录Ⅲ培养基与试剂配制166