铜调控蛋白CopC探究

第1章铜调控体系及铜蛋白家族
1.1铜在生物体内的必要性和毒性2
1.1.1铜在生物体内的必要性2
1.1.2铜的氧化损伤3
1.2铜稳态机理4
1.2.1细胞对铜的吸收4
1.2.2细胞内铜离子的运输载体6
1.3革兰氏阴性菌的铜抑制体系8
1.4Cop家族9
1.4.1CopC溶液结构10
1.4.2CopC晶体结构及铜配位情况14
参考文献19


第2章突变体MCopC的构建、表达、纯化
2.1MCopC的构建26
2.1.1基因体外定点突变主要方法及原理26
2.1.2MCopC的构建29
2.2MCopC的诱导、表达33
2.2.1诱导表达33
2.2.2菌体的破碎33
2.2.3蛋白浓度测定(考马氏亮蓝G250测定法)33
2.3MCopC的纯化33
2.3.1离子交换柱层析原理33
2.3.2DE-52纤维素阴离子交换树脂的处理34
2.3.3洗脱34
2.3.4凝胶柱层析原理35
2.4MCopC的检验35
2.4.1TriGly SDSPAGE分析35
2.4.2紫外谱的测定36
2.4.3凝胶色谱及质谱分析38
2.5结论39
参考文献39


第3章CopC色氨酸残基的特性
3.1CopC的荧光特征42
3.1.1不同激发波长下的CopC荧光42
3.1.2突变CopC的荧光42
3.1.3异于Burstein分类的蛋白44
3.1.4CopC晶体结构中色氨酸的位置44
3.2酪氨酸和色氨酸间的能量转移45
3.3色氨酸在CopC中所处的环境47
3.4色氨酸突变对蛋白性质的影响48
3.4.1色氨酸突变对Cu(Ⅱ)结合能力的影响48
3.4.2色氨酸突变对构象影响51
3.4.3色氨酸突变对蛋白热稳定性的影响52
3.5结论54
参考文献55


第4章CopC稳定性
4.1GuHCl引起的CopC变性58
4.2两态模型60
4.2.1光谱参数变化60
4.2.2荧光相位图61
4.2.3铜结合能力变化62
4.3CopC和CopCCu(Ⅱ)稳定化能计算63
4.4解折叠动力学64
4.5其他影响因素67
4.5.1pH影响67
4.5.2温度的影响68
4.6结论69
参考文献70


第5章萘胺类化合物对CopC构象的干扰
5.1TNS对CopC构象的干扰74
5.1.1TNS对CopC构象的干扰74
5.1.2TNS与CopC间的作用力78
5.1.3机理推测80
5.2α-NA对CopC构象的干扰81
5.2.1α-NA对CopC构象的干扰81
5.2.2NA与CopC作用机理84
5.3结论86
参考文献86


第6章CopC在Cu(Ⅱ)转运中的作用
6.1MCopC与CopC-Cu(Ⅱ)反应常数90
6.2MCopC与CopC-Cu(Ⅱ)反应热力学92
6.3MCopC与CopC-Cu(Ⅱ)反应动力学93
6.4反应机理95
6.4.1CopC-Cu(Ⅱ)与EDTA的反应96
6.4.2CopC-Cu(Ⅱ)与CDTA的反应97
6.4.3CopC-Cu(Ⅱ)与MCopC的反应98
6.5结论101
参考文献102


第7章CopC中Cu(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)位点协同性
7.1两位点协同性106
7.2结论110
参考文献110


第8章CopC与Au(Ⅲ)离子的作用
8.1CopC与Au(Ⅲ)相互作用112
8.1.1Au(Ⅲ)引起CopC荧光猝灭112
8.1.2电势变化113
8.1.3Au(Ⅲ)与CopC的结合常数114
8.1.4Au(Ⅲ)催化抗坏血酸氧化受CopC的影响118
8.2Au(Ⅲ)结合对CopC构象的影响119
8.3结论121
参考文献121


第9章铜在配合物与CopC间的转运
9.1铜配合物\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O］124
9.1.1铜配合物\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O\]结构124
9.1.2配合物光谱特征126
9.1.3配合物与EDTA的反应128
9.2铜配合物\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O\]与CopC的反应129
9.2.1光谱研究129
9.2.2循环伏安分析132
9.3结论133
参考文献133


缩略语134