分子细胞生物学实验技术[电子资源.图书]

1 DNA的制备和分析
1.1 细菌质粒的制备
1.1.1 碱裂解法
1.1.2 煮沸法
1.1.3 小量一步提取法
1.1.4 DNA制备试剂盒
1.2 酵母DNA的制备
1.2.1 酵母细胞质粒DNA的分离
1.2.2 酵母染色体DNA的提取
1.2.3 醋酸锂法转化酵母细胞
1.2.4 电击转化酵母细胞
1.3 植物DNA的制备
1.3.1 植物细胞核基因组DNA的提取与纯比
1.3.2 植物线粒体基因组DNA的提取
1.3.3 植物叶绿体基因组DNA的提取
1.4 cDNA文库入重组DNA的提取
1.4.1 大量制备λDNA
1.4.2 小量制备λDNA
1.5 质粒DNA电镜制样技术
1.6 植物根尖细胞核染色质层层技术
1.7 DNA、RNA的定量测定及分析
1.7.1 紫外吸收法测定核酸含量
1.7.2 二苯胺显色法测定DNA含量
1.7.3 地衣酚显色法测定RNA含量
1.7.4 定磷法测定核酸含量
2 DNA克隆
2.1 DNA的酶切
2.2 DNA片段的纯化回收
2.2.1 低熔点胶法
2.2.2 玻璃奶(Giassmilk)法
2.2.3 DNA回收试剂盒法
2.2.4 冻融法
2.3 DNA的重组、转化和蓝白筛选
2.4 Southern印迹杂交
2.4.1 同位素标记探针的分子杂文
2.4.2 DIG标记探针的分子杂交
2.5 菌落或噬菌斑的原位杂交
2.6 DNA序列分析
3 RNA的制备和分析
3.1 植物组织总RNA的制备
3.1.1 异硫氰酸胍(GIT)-氯化铯(CsCl)超离心法
3.1.2 异硫氰酸胍-酚法
3.1.3 热酚法
3.2 RNA的定量和完整性分析
3.2.1 甲醛变性电泳检测RNA完整性
3.2.2 紫外分光光度计测定RNA含量和纯度
3.3 mRNA的分离和纯化
3.3.1 Oligo(dT)纤维素亲和层析法
3.3.2 磁珠法
3.4 Northern印迹杂交
3.5 液体闪烁计测定法
3.6 转录起始位点的测定
3.6.1 核酸酶Sl保护分析法
3.6.2 RNA酶保护分析法
3.6.3 引物延伸分析法
3.7 行进转录分析
4 cDNA文库的构建
4.1 λZAP\+ExpresscDNA文库的构建
4.1.1 cDNA的合成及修饰
4.1.2 体外重组DNA
4.1.3 λ重组DNA的体外包装
4.1.4 λ噬菌体的转染
4.1.5 体内剪切
4.2 扣除文库的构建
4.2.1 RNA制备
4.2.2 mRNA的提取
4.2.3 mRNA样品的DNase I处理
4.2.4 Tester样品cDNA第一链的合成
4.2.5 mRNA的水解
4.2.6 DNA/RNA溶液杂交
4.2.7 DNA/RNA铰链
4.2.8 扣除cDNA的克隆
4.3 利用LD—合成cDNA及cDNA文库的构建
4.3.1 cDNA的合成
4.3.2 cDNA文库的构建
4.3.3 转变λTriplEx2成为TriplEx2质粒
5 PCR相关技术
5.1 PCR技术
5.1.1 基础PCR
5.1.2 PCR产物的TA克隆
5.1.3 原位PCR
5.1.4 PCR法筛选cDNA文库
5.1.5 再生式序列复制反应(3SR)
5.1.6 PCR快速扩增(RACE)获得全长cDNA
5.2 应用PCR技术克隆未知基因
5.2.1 反转录(RT)-PCR
5.2.2 差别显示反转录(DDRT)-PCR
5.2.3 RNA的任意引物(RAP) -PCR
5.3 分子标记技术
5.3.1 DNA限制性片段长度多态性(RFLP)分析
5.3.2 随机扩增多态性(RAPD)分析
5.3.3 微卫星DNA多态性分析
6 基因表达与调控研究技术
6.1 植物组织培养再生体系的建立
6.1.1 离体器官直接再生不定芽的培养
6.1.2 愈伤组织培养
6.2 植物遗传转化体系的建立
6.2.1 农杆菌介导的转化
6.2.2 基因枪转化技术
6.2.3 电激转化技术
6.2.4 转基因植株的鉴定
6.2.5 外源目标基因在转基因植株中的表达
6.3 Southwestern法筛选转录因子cDNA的克隆
6.4 一步杂交法克隆DNA结合蛋白的cDNA
6.5 异源互补法筛选低丰度的基因
6.5.1 cDNA表达文库的构建
6.5.2 突变型(auxotroph)细胞的转化
6.6 真核细胞的基因在大肠杆菌中的表达
6.7 体外转录和翻译偶联检测法
6.8 凝胶阻滞分析
7 蛋白质的分离与分析
7.1 蛋白质的电泳技术
7.1.1 聚丙烯酰眩凝胶-等电聚焦电泳
7.1.2 蛋白质的双向电泳技术
7.1.3 高效毛细管电泳
7.2 植物同工酶电泳分析技术
7.3 免疫分析技术
7.3.1 免疫血清的制备
7.3.2 酶联免疫吸附测定
7.3.3 双向免疫扩散技术—-—平板法
7.4 薄层层析技术分离分析氨基酸
7.5 Western—印迹杂交
8 细胞生物学常用技术
8.1 植物细胞质膜的分离和纯化技术
8.2 植物细胞器标记酶的测定
8.3 植物细胞、组织或器官氧化还原活性的测定
8.4 植物原生质体的培养
8.5 植物组织中几种酶的组织化学定位鉴定
8.6 植物激素的提取和鉴定
8.7 放射免疫分析法测定几种激素
8.7.1 血清或血浆孕酮放射免疫测定法
8.7.2 组织中cAMP测定法(蛋白结合法)
8.7.3 血清雌二醇(Estradi01)的测定
8.7.4 人绒毛膜促性腺激素(HCG)的放免测定
8.8 显微摄影技
8.8.1 显微摄影装置
8.8.2 感光片的选择与应用
8.8.3 滤光镜的作用
8.8.4 黑白底片的冲洗
8.8.5 黑白照片放大
9 计算机技术在分子生物学中的应用
9.1 国际互联网(Internet)的应用概述
9.2 序列分析软件
9.3 引物评价的计算机软件
9.4 序列数据向数据库的传送
9.5 常用数据库及其软件
9.5.1 BLAST程序家族所适用的范围
9.5.2 用于BLAST程序的数据库
9.5.3 用于分子生物学的免费分析软件
9.5.4 分子生物学中常用的数据库
9.5.5 Internet上的生物学杂志及其网址
9.5.6 常用的分子生物学网址
附录
附录1 有关核酸的常用数据
1.1 常用核酸的长度与分子量
1.2 常用核酸与蛋白质换算数据
1.3 DNA在溶液中的浓度
附录2 酶类
2.1 溶菌酶
2.2 蛋白水解酶
2.3 无DNA酶的RNA酶
附录3 缓冲液
3.1 常用缓冲液
3.2 电泳缓冲液
3.3 常用的凝胶加样缓冲液
3.4 测序凝胶加样缓冲液
附录4 与DNA凝胶电泳有关的数据
4.1 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的分辨范围
4.2 聚丙烯酰胺凝胶浓度与线性DNA的分辨范围
4.3 染料在非变性聚丙烯酰胺疑胶中的迁移速度
4.4 染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度
附录5 细菌培养基和抗生素
5.1 液体培养基
5.2 含有琼脂或琼脂糖的培养基
5.3 保存培养基
5.4 抗生素
5.5 用于噬菌体操作的溶液
附录6 杂交实验中用于降低背景的封闭剂
6.1 Denhardt试剂
6.2 BLOTTO
6.3 肝素
6.4 经变性并被打断的鲑精DNA
附录7 分子生物学有毒试剂的净化处理和安全使用
附录8 图表目录
附录9 人类遗传疾病在染色体上的定位
附录10 酵母遗传学命名法
附录11 缩略语表
1 DNA的制备和分析
1.1 细菌质粒的制备
1.1.1 碱裂解法
1.1.2 煮沸法
1.1.3 小量一步提取法
1.1.4 DNA制备试剂盒
1.2 酵母DNA的制备
1.2.1 酵母细胞质粒DNA的分离
1.2.2 酵母染色体DNA的提取
1.2.3 醋酸锂法转化酵母细胞
1.2.4 电击转化酵母细胞
1.3 植物DNA的制备
1.3.1 植物细胞核基因组DNA的提取与纯比
1.3.2 植物线粒体基因组DNA的提取
1.3.3 植物叶绿体基因组DNA的提取
1.4 cDNA文库入重组DNA的提取
1.4.1 大量制备λDNA
1.4.2 小量制备λDNA
1.5 质粒DNA电镜制样技术
1.6 植物根尖细胞核染色质层层技术
1.7 DNA、RNA的定量测定及分析
1.7.1 紫外吸收法测定核酸含量
1.7.2 二苯胺显色法测定DNA含量
1.7.3 地衣酚显色法测定RNA含量
1.7.4 定磷法测定核酸含量
2 DNA克隆
2.1 DNA的酶切
2.2 DNA片段的纯化回收
2.2.1 低熔点胶法
2.2.2 玻璃奶(Giassmilk)法
2.2.3 DNA回收试剂盒法
2.2.4 冻融法
2.3 DNA的重组、转化和蓝白筛选
2.4 Southern印迹杂交
2.4.1 同位素标记探针的分子杂文
2.4.2 DIG标记探针的分子杂交
2.5 菌落或噬菌斑的原位杂交
2.6 DNA序列分析
3 RNA的制备和分析
3.1 植物组织总RNA的制备
3.1.1 异硫氰酸胍(GIT)-氯化铯(CsCl)超离心法
3.1.2 异硫氰酸胍-酚法
3.1.3 热酚法
3.2 RNA的定量和完整性分析
3.2.1 甲醛变性电泳检测RNA完整性
3.2.2 紫外分光光度计测定RNA含量和纯度
3.3 mRNA的分离和纯化
3.3.1 Oligo(dT)纤维素亲和层析法
3.3.2 磁珠法
3.4 Northern印迹杂交
3.5 液体闪烁计测定法
3.6 转录起始位点的测定
3.6.1 核酸酶Sl保护分析法
3.6.2 RNA酶保护分析法
3.6.3 引物延伸分析法
3.7 行进转录分析
4 cDNA文库的构建
4.1 λZAP\+ExpresscDNA文库的构建
4.1.1 cDNA的合成及修饰
4.1.2 体外重组DNA
4.1.3 λ重组DNA的体外包装
4.1.4 λ噬菌体的转染
4.1.5 体内剪切
4.2 扣除文库的构建
4.2.1 RNA制备
4.2.2 mRNA的提取
4.2.3 mRNA样品的DNase I处理
4.2.4 Tester样品cDNA第一链的合成
4.2.5 mRNA的水解
4.2.6 DNA/RNA溶液杂交
4.2.7 DNA/RNA铰链
4.2.8 扣除cDNA的克隆
4.3 利用LD—合成cDNA及cDNA文库的构建
4.3.1 cDNA的合成
4.3.2 cDNA文库的构建
4.3.3 转变λTriplEx2成为TriplEx2质粒
5 PCR相关技术
5.1 PCR技术
5.1.1 基础PCR
5.1.2 PCR产物的TA克隆
5.1.3 原位PCR
5.1.4 PCR法筛选cDNA文库
5.1.5 再生式序列复制反应(3SR)
5.1.6 PCR快速扩增(RACE)获得全长cDNA
5.2 应用PCR技术克隆未知基因
5.2.1 反转录(RT)-PCR
5.2.2 差别显示反转录(DDRT)-PCR
5.2.3 RNA的任意引物(RAP) -PCR
5.3 分子标记技术
5.3.1 DNA限制性片段长度多态性(RFLP)分析
5.3.2 随机扩增多态性(RAPD)分析
5.3.3 微卫星DNA多态性分析
6 基因表达与调控研究技术
6.1 植物组织培养再生体系的建立
6.1.1 离体器官直接再生不定芽的培养
6.1.2 愈伤组织培养
6.2 植物遗传转化体系的建立
6.2.1 农杆菌介导的转化
6.2.2 基因枪转化技术
6.2.3 电激转化技术
6.2.4 转基因植株的鉴定
6.2.5 外源目标基因在转基因植株中的表达
6.3 Southwestern法筛选转录因子cDNA的克隆
6.4 一步杂交法克隆DNA结合蛋白的cDNA
6.5 异源互补法筛选低丰度的基因
6.5.1 cDNA表达文库的构建
6.5.2 突变型(auxotroph)细胞的转化
6.6 真核细胞的基因在大肠杆菌中的表达
6.7 体外转录和翻译偶联检测法
6.8 凝胶阻滞分析
7 蛋白质的分离与分析
7.1 蛋白质的电泳技术
7.1.1 聚丙烯酰眩凝胶-等电聚焦电泳
7.1.2 蛋白质的双向电泳技术
7.1.3 高效毛细管电泳
7.2 植物同工酶电泳分析技术
7.3 免疫分析技术
7.3.1 免疫血清的制备
7.3.2 酶联免疫吸附测定
7.3.3 双向免疫扩散技术—-—平板法
7.4 薄层层析技术分离分析氨基酸
7.5 Western—印迹杂交
8 细胞生物学常用技术
8.1 植物细胞质膜的分离和纯化技术
8.2 植物细胞器标记酶的测定
8.3 植物细胞、组织或器官氧化还原活性的测定
8.4 植物原生质体的培养
8.5 植物组织中几种酶的组织化学定位鉴定
8.6 植物激素的提取和鉴定
8.7 放射免疫分析法测定几种激素
8.7.1 血清或血浆孕酮放射免疫测定法
8.7.2 组织中cAMP测定法(蛋白结合法)
8.7.3 血清雌二醇(Estradi01)的测定
8.7.4 人绒毛膜促性腺激素(HCG)的放免测定
8.8 显微摄影技
8.8.1 显微摄影装置
8.8.2 感光片的选择与应用
8.8.3 滤光镜的作用
8.8.4 黑白底片的冲洗
8.8.5 黑白照片放大
9 计算机技术在分子生物学中的应用
9.1 国际互联网(Internet)的应用概述
9.2 序列分析软件
9.3 引物评价的计算机软件
9.4 序列数据向数据库的传送
9.5 常用数据库及其软件
9.5.1 BLAST程序家族所适用的范围
9.5.2 用于BLAST程序的数据库
9.5.3 用于分子生物学的免费分析软件
9.5.4 分子生物学中常用的数据库
9.5.5 Internet上的生物学杂志及其网址
9.5.6 常用的分子生物学网址
附录
附录1 有关核酸的常用数据
1.1 常用核酸的长度与分子量
1.2 常用核酸与蛋白质换算数据
1.3 DNA在溶液中的浓度
附录2 酶类
2.1 溶菌酶
2.2 蛋白水解酶
2.3 无DNA酶的RNA酶
附录3 缓冲液
3.1 常用缓冲液
3.2 电泳缓冲液
3.3 常用的凝胶加样缓冲液
3.4 测序凝胶加样缓冲液
附录4 与DNA凝胶电泳有关的数据
4.1 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的分辨范围
4.2 聚丙烯酰胺凝胶浓度与线性DNA的分辨范围
4.3 染料在非变性聚丙烯酰胺疑胶中的迁移速度
4.4 染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度
附录5 细菌培养基和抗生素
5.1 液体培养基
5.2 含有琼脂或琼脂糖的培养基
5.3 保存培养基
5.4 抗生素
5.5 用于噬菌体操作的溶液
附录6 杂交实验中用于降低背景的封闭剂
6.1 Denhardt试剂
6.2 BLOTTO
6.3 肝素
6.4 经变性并被打断的鲑精DNA
附录7 分子生物学有毒试剂的净化处理和安全使用
附录8 图表目录
附录9 人类遗传疾病在染色体上的定位
附录10 酵母遗传学命名法
附录11 缩略语表